Khi bảo tàng lịch sử tự nhiên phải tạm ngừng hoạt động để phục vụ công tác trùng tu, toàn bộ các mô hình tượng cùng hiện vật trưng bày được đóng gói chuyển sang kho dự trữ liên bang. Dù Larry Daley đã thôi làm công việc gác đêm, anh lập tức lên đường mạo hiểm thâm nhập vào khu lưu trữ mới ngay khi nghe tin những người bạn cũ là tượng Cựu tổng thống Roosevelt và chàng cao bồi Jedediah gặp nguy khốn. Tại địa điểm mới này, Larry lại phải trải qua những giờ phút nghẹt thở khi các mẫu vật trưng bày tiếp tục thức tỉnh và gây náo loạn dữ dội, cuốn anh vào chuỗi rắc rối đầy trớ trêu nhưng không kém phần gay cấn. Đêm Ở Viện Bảo Tàng: Trận Chiến Hoàng Gia thuộc thể loại hài hước phiêu lưu kết hợp hành động giả tưởng do Shawn Levy đạo diễn, với sự góp mặt của Ben Stiller, Amy Adams và Owen Wilson.